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低温保存对Hep-G2细胞凋亡的影响

[导读]低温保存对Hep-G2细胞凋亡的影响。

摘要 样本质量是体现生物样本库价值的关键,但是低温保存可能导致细胞凋亡及基因表达量的变化,影响样本质量。本文采用流式细胞术与实时荧光定量PCR( qPCR) 的方法,研究了Hep-G2 细胞在不同条件下冻存后凋亡及相关基因表达量。结果表明: 低温保存影响Hep-G2 细胞的成活率、凋亡情况及某些凋亡基因表达量。无论冻存过程中是否添加低温保护剂,低温保存都会对细胞的凋亡相关基因表达带来不同程度的影响。不添加保护剂冻存会导致细胞死亡,添加10% DMSO 冻存会导致细胞凋亡,复苏培养24 h 后细胞的成活率、凋亡情况与相关基因表达量基本与对照组水平一致。

关键词 低温保存; 细胞凋亡; 流式细胞术

细胞凋亡是医学基础研究的重要内容。生物样本库低温保存的样本主要服务于转化医学研究,用于新药开发的实验,这需要在样本保存后不发生凋亡特性的改变,并且凋亡相关的基因表达水平也不能发生改变。添加冷冻保护剂保存样本可以使冻存的样本具有活性,应用于样本扩大化或PDX 模型的建立。细胞凋亡也是器官组织深低温保存后丧失功能的重要原因。因此研究冷冻对细胞凋亡的影响具有重要意义。本文以Hep-G2 细胞为模型,对低温保存后细胞的成活率、凋亡率及几个凋亡相关基因表达量三个方面进行了研究。



本文通过用流式细胞术与实时荧光定量PCR 对Hep-G2 细胞进行凋亡情况的研究,得到如下结论:

1) 无论冻存过程中是否添加低温保护剂,低温保存都会对细胞的凋亡相关基因表达带来不同程度的影响。

2) 不加保护剂冻存会导致细胞死亡,添加10%DMSO 冻存会导致细胞凋亡,复苏培养24 h 后细胞的成活率和凋亡情况与相关基因表达量基本与对照组水平一致。

3) 本文仅对一种细胞冻存后的凋亡情况和几个凋亡相关基因表达量进行了研究,还有许多凋亡通路中的相关基因需要进一步研究。

4) 实验中所选的保护剂DMSO 会对细胞凋亡带来较大影响,可通过添加凋亡抑制剂或更换保护剂以减少细胞凋亡,稳定凋亡相关基因表达。



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