1 前言大肠埃希菌 (革兰氏阴性短杆菌) , 俗名大肠杆菌, 周身鞭毛, 能运动, 无芽孢, 是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。根据致病性的不同, 致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。部分埃希菌菌株与婴儿腹泻有关, 并可引起成人腹泻或食物中毒的暴发。在实际工作中, 常用到培养箱对各种样品进行培养分离, 而不同原理的培养箱对大肠埃希菌的生长有不同的影响。其中, 常用的培养箱有3类:隔水式培养箱、电热式培养箱、生化培养箱。隔水式培养箱是具有高精度的恒温设备, 其温度波动范围为±0.5℃, 可用于植物组织发芽、育苗、微生物的培养、昆虫和小动物的饲养、水质检测的生化需氧量 (BOD) 的测定及其他用途的恒温试验, 是生物遗传工程、医药、农、林、环境科学、畜牧、水产等生产、科研、教育部门的理想设备。电热式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成, 电热式培养箱的夹层用石棉或玻璃棉等绝热材料制成, 以增强保温效果, 培养箱顶部设有温度计, 用温度控制器自动控制, 使箱内温度恒定。直接电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热, 利用空气对流, 使箱内温度均匀, 其温度波动范围为±2℃。生化培养箱具有制冷和加热双向调温系统, 温度可控的功能, 其温度波动范围为±2.5℃, 是生物、遗传工程、医学、卫生防疫、环境保护、农林畜牧等行业的科研机构、大专院校、生产单位或部门实验室的重要试验设备, 广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等试验过程中。生化培养箱控制器电路由温度传感器、电压比较器和控制执行电路组成。虽然3种培养箱都可以培养大肠埃希菌, 但是3种培养箱的加热方式不一样, 温度波动范围不同, 对大肠埃希菌的生长有一定的影响。为使本实验的研究结论具有通用性和普遍性, 本实验选择了一株大肠埃希菌菌株作为研究对象[1], 将其接种到培养基中, 放入不同的培养箱中, 观察培养箱的温度波动, 研究其对大肠埃希菌生长的影响。2 材料与方法2.1 仪器生物安全柜;电热式培养箱 (DH6000B, 天津市泰斯特仪器有限公司) ;隔水式培养箱 (HENGZi, 上海跃进医疗器械有限公司) ;生化培养箱 (SPX智能型, 宁波市科技园区新江南仪器有限公司) 。2.2 试剂与材料大肠埃希菌标准菌株 (ATCC25922) ;营养琼脂 (170103) ;乳糖蛋白胨培养基 (170517) ;灭菌生理盐水 (201702140) 。2.3 方法2.3.1 菌种的活化将冻藏的大肠埃希菌标准菌株磁珠用接种环取出, 用接种环把大肠埃希菌标准菌株磁珠在营养琼脂平板上分区划线。把划线的营养琼脂平板放入 (37±0.5) ℃培养箱培养24 h。2.3.2 菌液的制备以及菌落的计数挑取菌落到1 m L灭菌磷酸缓冲液中, 制成1麦氏比浊度的菌悬液。从菌悬液中吸取0.5～4.5 m L灭菌生理盐水中, 制成1∶10的稀释液, 然后逐一10倍稀释到10-7麦氏比浊度。取10-7麦氏比浊度的稀释液采用多管发酵法完成实验。取样量分别为1 m L、0.1 m L、0.01 mL。每次试验做3份多管发酵法试验, 共做7次。每次试验的3份多管发酵法试验分别放入隔水式培养箱、电热培养箱、生化培养箱中, 44.5℃培养24 h。同时吸取10-7麦氏比浊度的稀释液2 m L, 分别于2个平皿各1 mL, 每个平皿倾注约15 mL已融化并冷却到约45℃的营养琼脂培养基, 并立即旋摇平皿, 使稀释液与培养基充分混匀, 待冷却凝固后, 翻转平皿, 使底面向上, 置于44.5℃培养内培养48 h, 进行菌落计数, 共做7次。2.3.3 温度的记录从早上开始上班时记录不同培养箱的的温度, 每隔1 h记录一次。